Universidad central del ecuador




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títuloUniversidad central del ecuador
fecha de publicación18.08.2016
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UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICAS

QUIMICA EN ALIMENTOS

LABORATORIO DE BIOTECNOLOGÍA

NOMBRE: Andrea Cruz
RESUMEN

CONTROL DE CEPAS
REACTIVACIÓN DE CEPAS


  1. Retirar del vial congelado a -20ºC y verificar que esté bien cerrado.

  2. Esperar hasta la descongelación completa del vial antes de realizar la recuperación de los microorganismos.

  3. El medio de cultivo líquido para reactivar los microorganismos es el caldo BHI, preparado en tubos de 13 x 100 en cantidad de 3 ml; se preparó 5 días antes y se conservó entre 2 y 8 °C.

  4. Sembrar una asada de cada microorganismo con asa estéril e inocular en el BHI a 37°C por tres (3) horas, antes de ser sembrados en los medios selectivos.

  5. Los viales con los microorganismos también se colocan a 37ºC por tres horas para realizar una siembra directa en los medios selectivos.

  6. Los medios de cultivo selectivos elegidos para la recuperación deben ser de baja selectividad los cuales se deben ambientar por 15 minutos a 37°C antes de ser sembrados.

  7. A las tres (3) horas, se siembran en los medios selectivos los microorganismos de los viales descongelados y del BHI ambientados y se incuban a 37°C por 18 horas.



Conservante:

Se utilizó glicerol al 10%, el cual fue añadido a cada tubo, una vez sembrada la suspensión de células bacterianas a congelar.

Temperatura de congelación:

-20ºC.
TÉCNICAS DE AISLAMIENTO
Selección


  1. La cepa a utilizar debe ser genéticamente estable

  2. Su velocidad de crecimiento debe ser alta

  3. La cepa debe estar libre de contaminación

  4. Debe ser de fácil conservación

  5. Debe ser de alto rendimiento y de fácil extracción del medio de cultivo


Propagación


  1. Se realiza siembras por técnicas de vertido con diferentes diluciones en medios de baja selectividad.

  2. Se elige aquellos grados de dilución con los cuales sea posible aislar colonias independientes.

  3. La toma y siembra de la colonia aislada desde la placa original se lleva a cabo con ayuda de un asa.

  4. Luego se utiliza la técnica de estriado en medios no selectivos.

  5. Con colonias bien aisladas se realiza una tinción Gram. para comprobar su pureza.


Preservación
Una vez confirmada la viabilidad, pureza, identificación microscópica por coloración de Gram y actividad enzimática de los microorganismos, se procede a preparar suspensiones de bacterias con 7.5 x108 UFC/ml, Escala de Mc Farland 4, posteriormente se coloca en cada vial de medio BHI, 100 µl de bacterias en suspensión y se agrega el glicerol al 10% (100 µl por 1 ml de medio) y se llevo a congelar en forma inmediata a - 20ºC.




La preservación debe garantizar la viabilidad, pureza y estabilidad genética de las cepas.

Debe garantizar la supervivencia de al menos el 70% de las células por un período considerable de tiempo.

Debe reducir al mínimo el riesgo de contaminación para que la pureza del cultivo permanezca inalterable.

VIABILIDAD DE CEPAS
Cuando la cepa está pura se cuantifica los microorganismos

Se realiza un inoculo de la cepa en BHI durante 24h, se siembra por vertido con diferentes diluciones y se incuban las cajas 24h a 37ºC.

Se realiza un contaje de las cajas que tengan colonias en un rango de 30 a 300 y se multiplica por el factor de dilución, este es el valor de referencia.

Se debe realizar el mismo procedimiento cada mes para comprobar la viabilidad.
PRUEBAS BIOQUÍMICAS Y DETERMINACIÓN DE GÉNERO Y ESPECIE
Las pruebas bioquímicas consisten en distintos test químicos aplicados a un cultivo puro, los cuales, conocida su reacción, nos permiten identificar distintos microorganismos presentes.

Su sistema de funcionamiento generalmente consiste en determinar la actividad de una vía metabólica a partir de un sustrato que se incorpora en un medio de cultivo y que la bacteria al crecer incorpora o no.

Para realizar las pruebas bioquímicas se dispone de múltiples medios, los cuales se deben aplicar de acuerdo a las exigencias del microorganismo en estudio.

Las más utilizadas son las denominadas pruebas primarias con las cuales se puede determinar el género, grupo de géneros y en algunas ocasiones la familia.

Para la determinación de Género y especie de microorganismos se utiliza:

1.       Tinción de Gram

2.       Características de las colonias en medios selectivos

3.       Pruebas bioquímicas y serológicas.

BIBLIOGRAFÍA:

  1. http://www.mailxmail.com/curso-cultivos-microbiologicos-referencia/cepas-coleccion-referencia

  2. http://www.unicolmayor.edu.co/invest_nova/NOVA/ARTORIG2_4.pdf

  3. http://www.uamenlinea.uam.mx/materiales/licenciatura/diversos/AQUIAHUATL_RAMOS_MARIA_DE_LOS_ANGELES_Manual_de_practicas_de.pdf

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