Investigación de ácidos fenólicos y flavonoides en hojas de yacóN




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títuloInvestigación de ácidos fenólicos y flavonoides en hojas de yacóN
fecha de publicación21.08.2016
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INVESTIGACIÓN DE ÁCIDOS FENÓLICOS Y FLAVONOIDES EN HOJAS DE YACÓN (Smallantus sonchifollius).

INVESTIGATION OF PHENOLIC ACID AND FLAVONOIDS IN YACÓN

(Smallantus sonchifollius) LEAVES.

Dary Luz Mendoza Meza*, Loreynis Parra Flórez

Grupo de Investigación en Productos Naturales y Bioquímica de Macromoléculas, Programa de Química, Universidad del Atlántico, Km 7 vía a Puerto Colombia- Barranquilla (Atlántico). * e-mail: darymendoza@mail.uniatlantico.edu.co

ABSTRACT. Yacón es un cultivo andino con importantes propiedades medicinales y nutricionales. En este estudio se usó la resina Amberlita XAD-2 para la purificación de los ácidos fenólicos y flavonoides presentes en extractos etanólicos de hojas de Yacón colectadas en Duitama, Boyacá. Las fracciones obtenidas se evaluaron por cromatografía en capa delgada, usando 2,2-difenil-1-picrilhidrazilo (DPPH) y reactivo de Folin-Ciocalteu como revelador. HPLC-MS identificó los ácidos cafeico, quinico, cafeoilquínico y cafeoilglucárico en todas las fracciones. También se identificó: ácido cafeoiltartárico, dicafeoilglucárico, dicafeoilquínico y un derivado de la quercetina. Estos compuestos contribuyen a la actividad captadora de radicales libres del Yacón.

PALABRAS CLAVE: Smallanthus sonchifolius, Yacón, DPPH, ácidos fenólicos, flavonoides.

INTRODUCCIÓN

Yacón (Smallanthus sonchifolius, Asteraceae) es una planta herbácea que hace parte de la dieta de las tribus indígenas en todo los Andes, desde Argentina hasta Colombia (1). Las hojas y tubérculos del Yacón son conocidos por sus propiedades etno-farmacológicas, sin embargo, en Colombia no se le da uso comercial a este cultivo a pesar de su gran potencial de transformación en productos procesados (2). Con el propósito de contribuir a la caracterización química de los metabolitos secundarios del Yacón cultivado en Colombia se investiga el contenido de ácidos fenólicos y flavonoides presentes en las hojas de Yacón colectadas en Duitama, departamento de Boyacá.

MATERIALES Y MÉTODOS

Material vegetal: Las hojas de Yacón se recolectaron de cultivos establecidos en la vereda Tocogua, aledaña al municipio de Duitama, Boyacá. La identidad botánica de la especie fue confirmada en el Herbario Nacional de Colombia (Código de Barras COL000362397, No. Catálogo 547142).

Extracto: Inicialmente se maceraron hasta pulverización, 0,25 Kg de hojas secas de Yacón. La extracción se realizó con etanol absoluto, durante 15 días bajo refrigeración. El extracto se filtró y se concentró a presión reducida, 50ºC y 36 rpm hasta sequedad. El reconocimiento de flavonoides se realizó mediante el ensayo de Shinoda, mientras que los fenoles se identificaron con el ensayo de FeCl3.

Purificación de fenoles y flavonoides: Esta se realizó por cromatografía de columna usando la resina Amberlita XAD-2, previamente activada con acetona (3). Se agregó a la columna el extracto total acidificado con HCl hasta pH 2.0. Los compuestos se eluyeron con H2O, H2O:MeOH (1:1, v/v) y MeOH, recolectándose fracciones de 1 mL. Este procedimiento se repitió con el extracto total sin acidificar. La presencia de fenoles y compuestos antioxidantes fue evaluada en cromatoplacas de Silica-Gel F254, usando las siguientes mezclas como fase móvil, n-hexano–acetato de etilo–ácido fórmico (20:19:1, v/v/v) y n-butanol-ácido acético-agua (4:1:5, v/v/v), respectivamente. Las cromatoplacas se revelaron con reactivo de Folin-Ciocalteu para fenoles y DPPH 0,5M para antioxidantes.

Ensayo DPPH: La capacidad captadora de radicales libres fue evaluada mediante el ensayo del 2,2-difenil-1-picrilhidrazilo (DPPH), para lo cual se preparó una solución metanólica de este radical de concentración 0,1mM (4). Un volumen de 50µL del extracto total y de cada fracción se mezcló con 2 mL del radical DPPH, la mezcla se incubó por 30 min en oscuridad, seguido se leyó la absorbancia a 517 nm, frente a un blanco. El mismo procedimiento se realizó con el estándar Trolox (CAS No.53188-07-1), usando concentraciones desde 1.28 mM hasta 0.04 mM, las lecturas con Trolox se usaron para construir un gráfico de referencia para el cálculo de la actividad de las muestras, expresadas como Equivalentes Trolox (ET). También se evaluó el % de captación del radical DPPH vs tiempo (estudio cinético).

Análisis HPLC-SM: El análisis de fenoles y flavonoides se realizó en un equipo Agilent 1100 G1956A VL-LC con detector selectivo de masas, usando la columna Zorbax Rapid Resolution Eclipse Plus Stable Bond Poroshell XDB-C18 de 100 mm x 4,6 mm d.i y 3,5 um de tamaño de partícula. La fuente de ionización usada fue electrospray (ESI) polaridad negativa. La interpretación se realizó por comparación de los espectros de masa obtenidos con aquellos reportados en la literatura.

RESULTADOS Y DISCUSIÓN

Las pruebas cualitativas fitoquímicas realizadas con el extracto total confirmaron la presencia de flavonoides y fenoles. Las fracciones eluídas de la columna acidificada de Amberlita XAD-2 fueron las que presentaron mayor actividad antioxidante (2,83-2,90 ET), este resultado se confirmó con el estudio cinético (Figura 1). La cromatografía en capa fina mostró un número mayor de antioxidantes en las fracciones eluídas con MeOH y la mezcla H2O-MeOH, respectivamente.



El análisis de HPLC-MS demostró la presencia de ácidos fenólicos en forma de agliconas y también en su forma conjugada (glucósidos). En todas las fracciones se identificó al ácido cafeico [M−H]- 179 m/z; ácido quinico [M−H]- 191 m/z, ácido cafeoilquínico [M−H]- 353 m/z y ácido cafeoilglucárico [M−H]- 371 m/z. Otros compuestos fueron: ácido dicafeoilquinico [M−H]- 515 m/z, dicafeoilglucarico [M-H]- 533 m/z, ácido cafeoiltartárico [M−H]- 311 m/z y un derivado del flavonoide quercetina [M−H]- 303 m/z. Estudios previos han reportado la presencia de ácidos fenólicos como protocatehuico, clorogénico, cafeico, ferúlico y dicafoilquinico en hojas de Yacón (5). Estos compuestos contribuyen significativamente a la actividad antioxidante de las hojas de Yacón cultivadas en Boyacá, Colombia.

REFERENCIAS

  1. Jacobsen, SE., Mujica, A., Ortiz, R. Fermentum. 2003, 13(36): 14-24.

  2. Lachman, J., Fernández, EC., Orsák, M. Plant Soil Environ. 2003, 49 (6): 283-290.

  3. Osler, KH., Goodwin, R. Journal of Natural Products. 1983, 47(1):188.

  4. Brand-Williams, W., Cuvelier, ME., Berset C. Lebensm Wiss Technol. 1995, 28 (1): 25-30.

  5. Simonovska, B., Vovk, I., Andrenšek S., Valentová, K., Ulrichová, J. J Chrom A. 2003, 1016:89-98.


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