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fecha de publicación13.09.2016
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UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

FACULTAD DE CIENCIS QUÍMICAS

QUÍMICA EN ALIMENTOS

LABORATORIO DE BIOTECNOLOGÍA

NOMBRE: Andrea Cruz

PRODUCCIÓN DE BIOMASA

MÉTODOS

Para estos métodos se requieren preparaciones limpias, sin partículas extrañas.

  1. MÉTODOS DIRECTOS



    1. Determinación del peso húmedo:


Es una técnica útil para grandes volúmenes de muestra. Se obtiene a partir de una muestra en suspensión que es pesada luego de la separación de las células por filtración o centrifugación, es decir,

  • Se tara un tubo.

  • Se centrifuga el cultivo y se elimina el sobrenadante.

  • Se determina el peso del sedimento

Inconvenientes: grandes errores, debido al líquido intercelular retenido, cuya cuantía depende a su vez de la forma y tipo de agrupaciones de la cepa, intensidad del empaquetamiento, esto contribuye al aumento de la masa total.

    1. Determinación del peso seco: 

Como el anterior, pero el sedimento se seca antes de ser pesado (105ºC, toda la noche), hasta peso constante. Las medidas de peso seco suelen representar el 10-15% de los valores de peso húmedo.

También se hace pasar la suspensión a través de un filtro de membrana de 0.22 mm de tamaño de poro y se lleva a un horno Pasteur a 80ºC hasta obtener peso constante.

Inconvenientes: método tedioso (requiere mucho tiempo) y con bastantes errores: es difícil pesar menos de 1 mg con exactitud en las balanzas habituales de laboratorio. 1 mg de peso seco equivale a unas 5x109 bacterias.

    1. Determinación del nitrógeno total:

Técnica de micro-Kjeldahl.

    1. Determinación de un componente característico:

Peptidoglucano, ADN, ARN, proteínas, ATP, clorofilas en organismos fotosintéticos.

Nota: se suele usar en bacterias para las que otros métodos más fáciles dan errores debido a que forman grumos no dispersables, crecen en filamentos. Se emplean en determinaciones de crecimientos en ambientes naturales.

  1. MÉTODOS INDIRECTOS



    1. Medida de consumo de nutrientes o de producción de algún metabolito por unidad de tiempo



Ejemplos: consumo de oxígeno (QO2) y consumo de carbónico (QCO2), determinados por el respirómetro de Warburg. Producción de ácidos.



    1. Métodos turbidimétricos (ópticos). 


Son muy usados en la práctica cotidiana del laboratorio. La base común de estos métodos consiste en la medición de la cantidad de luz dispersada o transmitida a través de un cultivo bacteriano.

Nota: las suspensiones bacterianas dispersan la luz, al igual que cualquier partícula pequeña suspendida en agua (efecto Tyndall). La dispersión de la luz es, dentro de ciertos límites, proporcional a la masa del cultivo.

a) Espectrofotómetro: Este aparato es de uso habitual en cualquier laboratorio de Microbiología o Bioquímica. Mide la densidad óptica (D.O.), es decir, la absorbancia (una medida de la luz transmitida a través de la supensión).

Hay que realizar una curva estándar para relacionar los valores de A con la masa bacteriana en una muestra problema.

Nota: La cantidad de luz dispersada es proporcional al cociente entre el tamaño de la partícula y la longitud de onda incidente; la sensibilidad de la técnica aumenta pues a longitudes de onda (l) cortas. La proporcionalidad entre A y masa bacteriana sólo es válida para >107céls/ml.

b) Nefelómetro: Es un aparato similar al anterior, pero el dispositivo sensor está situado en ángulo recto respecto de la dirección de la luz incidente, y lo que se mide es pues, la luz dispersada directamente por la preparación. Posee mayor sensibilidad que el espectrofotómetro.

  1. BIBLIOGRAFÍA:

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