Universidad central del ecuador




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fecha de publicación26.10.2015
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UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICAS

ESCUELA DE BIOQUIMICA Y FARMACIA

CARRERA QUIMICA DE ALIMENTOS




LABORATORIO DE BIOTECNOLOGIA
Nombre: Rentería Vanessa Día: Lunes

Fecha de entrega: 18/04/2011 Hora: 10:00-13:00
TEMA:

TURBIDIMETRIA, DENSIDAD OPTICA, CURVAS DE CRECIMIENTO VFENTAJAS Y DESVENTAJAS DEL METODO DE CUANTIFICACION DE BIOMASA

La turbidimetría es medida de la intensidad de un haz de luz incidente cuando éste pasa a través de una suspensión de partículas. Se mide a 0 grados del haz incidente, es decir, en su misma dirección. La disminución de la intensidad se puede medir como %T o como A en cualquier espectrofotómetro.

Cuando un haz de luz choca contra una partícula en suspensión sufre los siguientes fenómenos:

  • Dispersión de la luz

  • Reflexión

  • Absorción

  • Transmisión


La Dispersión de la luz depende de varios factores:

  • Tamaño y peso molecular de las partículas

  • Longitud de onda de la luz incidente

  • Distancia del detector a la cubeta

  • Concentración de partículas

DENSIDAD OPTICA

El Espectrofotómetro mide la densidad óptica (D.O.), es decir la absorbancia o extinción E que es la medida de la luz transmitida a través de la suspensión, hay que realizar una curva estándar para relacionar los valores de A con la masa bacteriana en una muestra problema; la cantidad de luz dispersada es proporcional al cociente entre el tamaño de la partícula y la longitud de onda incidente; la sensibilidad de la técnica aumenta pues a longitudes de onda (λ) cortas. La proporcionalidad entre A y masa bacteriana sólo es válida para >107céls/ml.

La densidad óptica es igual a:

CURVAS DE CRECIMIENTO

Para estimar el número de microorganismos totales o el número de microorganismos viables de una suspensión bacteriana debe realizarse una curva de calibración con cada tipo de microorganismo, sólo de esta forma es posible relacionar Absorbancia (Densidad Óptica) con el número de microorganismos totales o con UFC.

ABSORBANCIA EN FUNCIÓN DE CONCENTRACION BACTERIANA



Absorbancia = K x Peso Seco; donde K: constante que varía con la longitud de onda utilizada y representa la inversa del peso seco del microorganismo que produce un aumento de 10 veces en el valor de la absorbancia (1/W0).

Peso seco: Concentración celular bacteriana expresada en unidades de peso seco (µg/ml-mg/ml). La relación directa entre la absorbancia y el peso seco sólo se aplica para suspensiones diluidas de bacterias, estas no deben tener una absorbancia mayor a 0.3, ya que valores mayores producen desviaciones de la ley de Beer.

INCONVENIENTE en suspensiones diluidas puede involucrar un mayor error de pipeteo y menor sensibilidad por el bajo nivel de absorción.

ABSORBANCIA EN FUNCIÓN DEL PESO SECO

DESVENTAJAS:

  • Cuando la concentración sobrepasa los límites de linealidad se deja de cumplir la Ley de Beer lo que se traduce a un resultado de una concentración falsa.

  • No es posible diferenciar a las células vivas de las muertas

VENTAJAS:

  • Permiten establecer la población total de microorganismos existentes

  • son rápidos

  • La metodología es útil con suspensiones de densidad microbiana baja y con cultivos en donde los microorganismos son unicelulares y con un tamaño de unos cuantos micrómetros, características que les permiten mantenerse suspendidos y homogéneamente distribuidos; en tanto que con microorganismos de mayor tamaño y con aquellos productores de polisacáridos esta metodología no es adecuada.

BIBLIOGRAFÍA:

  • http://es.scribd.com/doc/15957855/8-Cuantificacion-de-microorganismos-por-turbidimetria

  • http://es.scribd.com/doc/22450159/eq-8-cuantificacion-y-aislamiento-de-microorganismos-microbiologia

  • http://www.google.com/url?sa=t&source=web&cd=10&ved=0CGYQFjAJ&url=https%3A%2F%2Fwww.itescam.edu.mx%2Fprincipal%2Fsylabus%2Ffpdb%2Frecursos%2Fr51986.DOC&rct=j&q=turbidimetria%20%2Bdensidad%20optica&ei=xrOpTdKqK8nXgQekm4n0BQ&usg=AFQjCNF-RYK2i7CALA9P7J3z68DW21MbZQ&cad=rja

  • VOGUEL, Arthur, Química Analítica Cuantitativa, pgs.844, 845


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