Cuestionario previo práctica 3 Análisis fitoquímico preliminar
descargar 40.27 Kb.
|
 UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICOFACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES CUAUTITLÁN CAMPO 1 TECNOLOGÍA FARMACÉUTICA PRODUCTOS NATURALES GRUPO 1551 Cuestionario previo práctica 3 Análisis fitoquímico preliminar 26/Ago/13 Profesor Mario Arturo Morales Delgado
Los líquidos extractivos que se obtienen en la mayoría de los casos se concentran eliminando parcial o totalmente el solvente mediante los dos métodos siguientes:
Se puede distinguir distintos tipos de extractos según la concentración de principio activo respecto a la droga original y según su consistencia. Extractos fluidos: El solvente se ha evaporado en el rotavapor hasta conseguir una concentración de principio activo similar a la concentración de principio activo en la droga original. Tienen consistencia liquida y se obtienen generalmente por maceración o percolación. El solvente suele ser agua o mezclas hidroalcohólicas. También pueden obtenerse por disolución de extractos secos. Los extractos fluidos se alteran fácilmente en contacto con la luz y el aire. Son muy utilizados para obtener formas liquidas (jarabes, pociones, gotas, entre otras) ya que se manipulan y dosifican con facilidad. Extractos blandos: poseen una concentración de principio activo superior a la de la droga original y tienen consistencia semisólida. El solvente suele ser agua o mezclas hidroalcohólicas. Los extractos blandos son poco estables y resultan difíciles de manipular, por lo que prácticamente no se utilizan. Extractos secos: Se obtienen por evaporación total del solvente y tienen una consistencia de polvo. Presentan una concentración muy superior de principio activo que la droga original. Son preparados bastante estables (aunque en muchas ocasiones resultan higroscópicos) y de fácil manipulación que se pueden utilizar para preparar tinturas, extractos fluidos, etc. Actualmente es posible obtener extractos secos nebulizados todavía más estables que los extractos secos tradicionales, sobretodo porque son menos higroscópicos. Crioextractos: Se obtienen de la droga fresca congelada, de la que se extraen los principios activos mediante nitrógeno líquido y luego se añade alcohol etílico. Los crioextractos resultan muy caros pero son muy útiles para la extracción de proteínas y enzimas de ciertas especies.
La separación y purificación de los componentes de un extracto se realiza principalmente mediante técnicas cromatográficas. No obstante, existen algunos métodos por los que se puede lograr purificar el principio activo de modo directo:
Respecto a las técnicas cromatográficas, más frecuentemente utilizadas en el aislamiento de compuestos naturales, se basan fundamentalmente en los fenómenos físicos de adsorción-desorción, reparto o partición y gel filtración o de exclusión molecular. Otras, empleadas en la purificación de sustancias de naturaleza polímera, se basan en la electroforesis, en el uso de resinas intercambiadoras de iones, en la cromatografía de afinidad, etc. En cualquier caso, para lograr e1 aislamiento de un principio a partir de una mezcla, aquél debe ser capaz de distribuirse entre una fase móvil o eluyente (FM) y una fase estacionaria (FE). Entre el principio y la FE hay un equilibrio que queda roto por la FM aportada de modo continuo.
Existen diversos tipos de pruebas de carácter fisicoquímico para la identificación, menciono las físicas por ser importantes también.
Se trata de reacciones simples, específicas de algún principio activo o componente característico de una droga (alcaloides, antraquinonas, etc.), el cual actúa como "identificador" de dicha droga. Así, por ejemplo, la aparición del color rojo que adquiere la corteza de cáscara sagrada (Rhamnus Purshiana DC) debido a sus antraquinonas al ser tratada con solución amoniacal, es indicativo de su posible identidad.
Muchas sustancias (por ejemplo, la quinina en solución de ácido sulfúrico diluido), convenientemente iluminadas, emiten luz de diferente longitud de onda o color de la que incide sobre ellas. Esta luz emitida o fluorescencia cesa cuando se elimina la luz excitante. Generalmente la sustancia suele emitir una luz con una longitud de onda mayor (luz visible) cuando está bajo la influencia de una iluminación de longitud de onda más corta (luz ultravioleta o luz azul-violeta).
Este ensayo suele realizarse con drogas con principios fácilmente sublimables (antraquinonas, alcaloides). El estudio de las constantes cristalográficas, la determinación de punto de fusión o la producción de determinadas reacciones coloreadas características de los cristales formados sirven para la identificación de la droga. Para la identificación también se pueden utilizar los diferentes tipos y técnicas cromatográficas ya que las técnicas estas se basan en el mismo principio: la separación de las sustancias presentes en una mezcla dada, entre dos fases: una permanece fija (fase estacionaria), que puede ser sólida o líquida, mientras la otra eluye a través de la primera (fase móvil) y que puede ser un líquido, un gas o la combinación de ambos. Esto permite distinguir entre dos sistemas cromatográficos: el de adsorción y el de partición. La cromatografía se puede clasificar en cromatografía en papel, cromatografía en capa fina y cromatografía en columna, considerándose a la cromatografía de gas y a la líquida de alta resolución como extensiones de esta última. También se utiliza la electroforesis, la cual se basa en el transporte de su tandas cargada en un campo eléctrico.Para ello se impregna un soporte (papel, gelatina, sephadex, etc.) en un electrolito que lo hace conductor; en el centro del mismo se coloca la sustancia problema y se somete a diferencia de potencial generada por dos electrodos.
Alcaloides Precipitan a los alcaloides de sus soluciones:
Precipitan a los alcaloides de las soluciones acuosas ácidas, bajo la forma de poliiodatos complejos: de Bouchardat o de Wagner (solución acuosa de yodo en yodato potásico), Mayer-Valser (solución acuosa de tetra-yodomercuriato de potasio), de Dragendorff (yodato de bismuto y potasio). Con estos reactivos se obtienen combinaciones amorfas, coloreadas, a veces solubles en exceso de reactivo.
Ácido pícrico (2, 4,6- trinitro-1-fenol), etífnico (2,4,6-trinitro-1 -3 di fenol o trinitro resorcina) y otros derivados de núcleos bencénicos, naftalénicos y antracénicos. Al igual que en el caso anterior, forman precipitados cristalinos, en medio ácido o neutro, que se descomponen por los álcalis.
Minerales (cloruro de mercurio, cobre, zinc, oro, platino, dicromato potásico, etcétera) y orgánico (diversos ácidos sulfónicos, ácido ferro-cianhídrico, taninos, etcétera). Reactivos de coloración Se utilizan en particular para identificar y dosificar los alcaloides. Se emplean ácidos minerales concentrados especialmente el sulfúrico, a veces adicionado de molibdato amónico (reactivo de Frohde), paradimetil-aminobenzaldehido (Wasicky), y otros. Otros métodos Los espectros ultravioleta, infrarrojos, de masas, la resonancia magnética nuclear de protón y de carbon 13, rayos X, dicroísmo circular óptico, son de gran utilidad para la determinación de la estructura de este tipo de compuestos. Existen otras propiedades físicas y/o químicas que son particulares de algunos de ellos y que pueden ser interesantes para su identificación y dosificación. Saponinas La extracción de saponinas a partir de diversos materiales biológicos ha sido reportada, bajo múltiples procedimientos, sin embargo dada la naturaleza en gran manera polar de estos compuestos, todos los métodos coinciden en la extracción en caliente o en frío, con agua o alcoholes de bajo peso molecular, sobre salen el uso de metanol, etanol, butanol y mezclas de diferentes proporciones de estos alcoholes y agua. Para la identificación de saponinas se han desarrollado diversos ensayos, como el índice de hemólisis, propuesto por R. Kobert en 1912. En este método una suspensión de glóbulos rojos, lavados con anticipación, se mezcla con la saponina. La mezcla se deja reposar a temperatura ambiente por 20 h, el para calcular el índice hemolítico se divide el peso de la mezcla de reacción, entre el peso de extracto de saponina ensayado, este método a pesar de ser muy utilizado, tiene la desventaja de depender de la naturaleza de la saponina y de la especie animal de donde se obtuvieron los eritrocitos. Otro ensayo de uso común en la identificación de saponinas, es el número o índice de espuma, el cual se basa en la medición de la altura y el tiempo que dura la espuma formada por una solución de saponinas mediante agitación. No obstante, estos parámetros se ven influenciados directamente por la forma y la intensidad de mezclado. En la detección cualitativa de saponinas, también se ha aplicado el método denominado índice de pescado que consiste en la observación del grado de toxicidad de las saponinas en pescados. Por último uno de los ensayos más empleados en la determinación de saponinas es la cromatografía en capa fina (CCF), procedimiento en el que a partir del uso de reactivos reveladores específicos que forman productos coloreados se obtiene información no sólo de la presencia de saponinas, sino del tipo de éstas (triterpenoides y esteroidales). De la misma manera, para la cuantificación de saponinas, se han ideado diversos métodos, la mayoría de éstos basados en reacciones colorimétricas como el propuesto por Hiai quien propone el uso de vainillina y H2SO4 para la generación de grupos cromóforos en saponinas, los cuales son visibles en longitudes de onda alrededor de 455 a 460 nm. Sin embargo, pese a que se sabe que los cromóforos producidos mediante esta reacción son característicos, éstos no absorben a la misma longitud de onda, además de que la interferencia es muy marcada, razón por la cual es poco repetible. Triterpenos La cromatografía líquida de alta resolución (CLAR) es muy adecuada para el análisis cualitativo y cuantitativo por su mayor eficacia, admitiendo variedades como la adsorción sobre sílice, o bien la partición en fase reversa. A este re pecto se puede mencionar, como un ejemplo de particular complejidad, la separación de cuasinoides en fa e estacionaria fenilo, por elución con mezclas ternarias de metanol (A), aguametanol-ácido acético (90:9:1) con un 0,1 % de acetato amónico (B) y acetonitrilo (C). La espectroscopía de RMN (1H y 13C) proporciona datos suficientes para la identificación estructural inequívoca, tanto para la determinación del esqueleto básico, como de otros caracteres típicos, como la orientación espacial de los carboxilos, las orientaciones α o β de los hidroxilos, la estereoquímica de los anillos o la posición de los dobles enlaces. Taninos Para la detección de los taninos en drogas se pueden realizar una serie de ensayos comunes a todos los taninos y otros que permiten distinguir entre hidrolizables y condenados. Todos los taninos precipitan con solución de gelatina o con fenazona. Los taninos hidrolizables y condensados se pueden diferenciar según el color o precipitación con sales férricas; los taninos hidrolizables dan coloraciones y precipitados azul-negruzcos y los taninos condensados dan precipitados pardo-verdosos. Los taninos gálicos dan coloración rosa con iodato potásico y los taninos elágicos, con ácido nitroso en medio acético, dan coloración rosa que vira a púrpura y finalmente a azul. Las proantocianidinas dan color rojo con vanillina-clorhídrico y precipitan con el reactivo de Stiasny, formaldehido-clorhídrico. Los dos tipos de taninos se diferencian también por su comportamiento en medio ácido en caliente corno ya se ha indicado. En el caso de los taninos hidrolizables el ácido gálico y el ácido elágico obtenidos se detectan por cromatografía; igualmente, las antocianidinas se pueden extraer del medio con alcohol amílico e identificarlas por cromatografía. Para el análisis de los taninos en los extractos de drogas se utilizan las técnicas habituales: cromatografía en capa delgada de celulosa o sílice, seguida de observación al UV y pulverización con reactivo tales como cloruro férrico y ácido fosfowolfrámico; los condensados se pueden revelar además con vanillina-clorhídrico o ácido ptoluensulfónico. En la cromatografía líquida de alta resolución se emplean columnas de fase reversa, eluyendo con un alcohol (metanol o etanol) o acetonitrilo-agua y pequeña cantidad de ácido para reprimir la ionización de los grupos fenólicos. Flavonoides La reacción de la cianidina (magnesio en medio clorhídrico) permite distinguir alguno tipo de ílavonoides: coloración naranja con las ftavonas, rojo cereza con los flavonoles, violeta con las ftavanonas. Las técnicas cromatográficas, de modo particular la cromatografía en capa fina, es muy utilizada para la caracterización de los compuestos ftavonoides. El revelado de los cromatogramas se realiza por observación de la fluorescencia al UV (366 nm) y con diversos reactivos:
Glucósidos cianogénicos Los heterósidos cianogénicos son fácilmente hidrolizables a pH vecino a la neutralidad debido a β-glicosidasas endógenas, liberando un azúcar y una cianohidrina inestable que genera cianuro de hidrógeno y un derivado carbonado aldehido o cetona, esta segunda reacción es catalizada por una hidroxinitrilo liasa. En medio débilmente ácido y calor, la hidrólisis se produce de la misma manera. Las reacciones de identificación más usadas son:
Azúcares Las reacciones más usadas, son:
Glucósidos cardiotónicos Los cardenólidos se pueden reconocer en muestras biológicas mediante los ensayos de coloración con varios reactivos nitro, específicamente con los reactivos de Kedde, Legal y Raymond. Al igual que las saponinas esteroides, dan resultados positivos con el reactivo de Liebermann-Burchard, lo que permite diferenciarlos de las terpenlactonas y las cumarinas. Por otro lado, los carbohidratos ligados incluyen generalmente a la D-glucosa, LRhamnosa y desoxiazúcares. Estos últimos pueden reconocerse mediante el ensayo de Keller-Kiliani. Bibliografía
http://farmacia.udea.edu.co/~ff/Farmacognosia.pdf
http://farmacia.udea.edu.co/~ff/alcaloides.pdf
http://farmacia.udea.edu.co/~ff/saponinas2001.pdf
http://www.redalyc.org/pdf/730/73000311.pdf Av. 1° de Mayo S/N, Col. Sta. María las Torres Cuautitlán Izcalli, Estado de México CP.54740 | ||||||
