Manual para el manejo del software Empower




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títuloManual para el manejo del software Empower
fecha de publicación13.08.2016
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Manual para el manejo del software Empower

  • Temas:

  1. Crear Proyecto

  2. Desarrollo de Métodos

  3. Creación de un Conjunto de Métodos

  4. Configuración del Equipo y el Software Empower

  5. Creación de Métodos de Proceso

    1. Comprobación Manual del Método de Proceso

  6. Elaboración del informe



  1. Crear Proyecto

  • Abrir el Software Empower, ingresar usuario (System) y la contraseña (manager), luego se debe presionar OK.



A continuación aparecerá la siguiente ventana:

Nota: desde aquí en el icono “Configure System” se crea el proyecto y se realizan las configuraciones pertinentes.

  • Ingresar a: Configure System File New Project hacer clic en “Next” se debe seleccionar el tamaño del proyecto (250 MB) y el enunciado “Full Audit Trail Support” no debe estar seleccionado hacer clic en “Next” → “Photo Diode Array” (seleccionar) “Owner Only” (debe estar seleccionada) hacer clic en “Next” → hacer clic en “Next” “Project Name” (escribir el nombre del proyecto) “Finish” (finalizar).

Nota: de esta forma el “proyecto” ya esta creado. Una vez creado el proyecto, se debe crear el “método”.

  1. Desarrollo de Métodos

  • Iniciar nuevamente sesión en el software “Empower” (escribiendo el usuario y la clave correspondiente)





  • Luego se debe hacer clic donde dice “Advanced” y selecciono la interface “Quick Start” y presiono OK.



  • Se abrirá un cuadro de dialogo (“Select Project System”), a partir del cual se debe seleccionar el nombre del proyecto que fue creado anteriormente y el sistema cromatográfico que es “Defaul” y seleccionar “OK”.





  • A continuación se abrirá la ventana de análisis de la interfaz “Quick Start”.



  • Se debe presionar la pestaña “View Method” y la opción que dice “Instrument” y se abrirá la ventana “View Method Instrument”.

Nota: en esta ventana programo todas las condiciones del proyecto, tanto del método instrumental (dibujo uno encerrado en el círculo) como del detector (dibujo dos encerrado en el círculo). Las condiciones se modifican por separado (se debe hacer clic en cada uno).

Condiciones modificadas en:

Método Instrumental:

  • General: en esta pestaña se debe establecer el rango de la longitud de onda con la cual deseo trabajar de comienzo a fin (start wavelength – end wavelength)

  • Degas

  • Eventos

  • Flujo: establezco el flujo con el cual va ir pasando la fas móvil a través de la columna (ml/min)

  • Temperatura: modifico la temperatura a la cual quiero que se mantenga la columna.

  • Solvente: hay cuatro recuadros (solvente A, solvente B, solvente C, solvente D) en los cuales debo escribir la composición de la fase móvil y la proporción en la que se encuentra, dependiendo de por cual canal este pasando mi fase móvil.

  • Canal

Detector:

  • General

  • Eventos

  • Canal 1

  • Canal 2

Nota: las condiciones indicadas, aparecen en la parte superior del software (pestañas) al momento de hacer clic sobre cada uno de estos (método instrumental o detector).

  • Finalmente se debe presionar donde dice File → Save as… → se abrirá un cuadro para guardar el método instrumental (colocar el nombre), el cual estará dentro del proyecto que se creo anteriormente.



  • Una vez realizado esto, en la barra de estado (parte inferior de la pantalla) deberán aparecer los nombres asignados con el cual se guardo el método (Method Set) y el proyecto (Instrumental Method).


Nota: en el caso que el método instrumental ya haya sido creado (se hayan establecido todas las condiciones), se debe presionar el icono (carpeta de color amarillo), para abrir el método instrumental que ya fue creado.


  1. Creación de un conjunto de métodos



  • Para crear un conjunto de métodos se debe hacer clic en la pestaña “View Method” → “Method Set” (para poder abrir el conjunto de métodos).





  • En donde dice “Instrument Method” (encerrado en el circulo rojo) debo seleccionar el nombre del método (el cual fue creado anteriormente). Luego se debe guardar el método con el nombre seleccionado (presionando el disquete que aparece en la parte superior izquierda).



  • En la pestaña donde dice “Run Sample” → “Sample Queue” (se deben escribir, todos los parámetros de las muestras que serán inyectadas).



Parámetros que se deben tener en consideración:

  • Lista de modos: Run Only

  • Vial: se completa de acuerdo a la posición que ocupa la muestra.

  • Sample Name: se completa con el nombre de las muestras que se van a ainyectar.

  • Inj Vol: se completa con el volumen de inyección correspondiente a la muestra.

  • Function: Se debe seleccionar dependiendo si es un estándar (Standards), se asume que la concentración es conocida, o si es muestra (se debe seleccionar la opción “desconocido” ya que no se en que concentración se encuentra).

  • Method Set: selecciono el nombre con el cual se creo el método.

  • Run Time: tiempo de corrida total que dura la muestra.



  • Para realizar la adquisición de datos se debe comprobar de que la pestaña “View Acquisition” este seleccionada (de color naranjo)



  1. Configuración del Equipo y el Software Empower



  • Se debe encender, el detector y la pantalla del método instrumental y presionar en la pantalla, donde dice “Menu/Status” (todos los parámetros aparecen en cero).

“Esta es la ventana de análisis de muestra”.

  • Una vez encendido el equipo, y el software ubicado en la pestaña “Run Sample” se debe presionar el icono de “Equilibrado del sistema/monitorización de la línea base”, para abrir el cuadro de dialogo de configuración del equilibrado del sistema/monitorización de la línea de base (Setup Equilibrate/System Monitor).





  • Donde dice “Instrument Method” debo seleccionar de la lista el método que se ha creado al comienzo y a continuación hacer clic en “Setup” → “Equilibrate/Monitor”. Cuando comienza el equilibrado, aparecerá la línea base en el panel de visualización en tiempo real.

  • Al equilibrar el monitor, los datos que fueron guardados en el “Método Instrumental” (flujo, temperatura de la columna, solvente) deberán aparecer en la pantalla del equipo.

Nota: La temperatura de la columna ira aumentando poco a poco, hasta alcanzar la programada y cuando esta aun no es alcanzada, en la pantalla del equipo aparecerá un mensaje de alerta, se debe presionar “clear” cada vez que aparezca para eliminar el mensaje.

Nota: Para poder observar la línea base, se debe hacer clic en la pestaña “Run Sample” → “Control Panel” (se podrá observar la corrida de la línea base).

  • Mientras se esta estabilizando la linea base, ubico el mouse sobre el cromatograma y presiono con el botón derecho, en donde aparecerán varias opciones entre ellas: “Fullview” (volver al tamaño original una vez que hago zoom al cromatograma), “Customize Channels” (en la cual debo escribir las tres longitudes de onda especificas a la cual quiero medir y estas deben estar ticadas), también se puede configurar si deseo ver los cromatogramas juntos (“overlay in single plot”) o por separado (“separate plots”).



  • Cuando la línea base ya se haya estabilizado, se debe hacer clic en la herramienta (detener monitorización).

Nota: Debido a que el software ajusta automáticamente la escala del grafico en tiempo real, la línea de base puede aparecer con ruido.

  • Una vez que se detiene el proceso de monitorización, se debe hacer clic en el icono que dice “Corrida de la muestra”, es decir, se le dará partida a las inyecciones. Una vez que doy la partida aparece un cuadro en el cual debo especificar el nombre de la muestra (la que comenzara a correr) y luego se presiona “Run”.







  • Al hacer clic en el icono “Inyección de muestra” se abrirá el cuadro de dialogo de configuración de los parámetros de inyección única (Specify Single Inject Parameters).

NOTA: UNA VEZ QUE LAS INYECCIONES HAN SIDO GRABADAS Y COMIENZA LA CORRIDA EL TIEMPO DE CORRIDA DE LA MUESTRA NO SE PUEDE CAMBIAR.



Nota: se debe completar con el nombre de la muestra, la función (en el caso que sea estándar o muestra lo que se este inyectando), nombre del método, ubicación de la muestra en el vial, volumen de inyección, tiempo de corrida de la muestra y finalmente presionar “Inject”.

EL ICONO LO PRESIONO SOLO CUANDO QUIERO IR INYECTANDO LAS MUESTRAS UNA A UNA Y ASI EVITO COMPLETAR LA TABLA QUE APARECE AL PRESIONAR LA PESTAÑA “RUN SAMPLE” (VENTANA DE ANALISIS DE MUESTRA) YA QUE LA COMPLETO SOLO CUANDO QUIERO INYECTAR VARIAS MUESTRAS Y LAS ESCRIBO TODAS DE UNA SOLA VEZ.

Nota: Es aquí donde se realiza la adquisición de los datos, para luego poder procesarlos.

  1. Creación de Métodos de Proceso ( Integrar los datos – Calibrar los patrones – Cuantificar las muestras)





  • Hacer clic en la pestaña “Browse Project” (en donde estarán todas las inyecciones realizadas). En la parte superior de esta pestaña, existen subpestañas (Sample Sets - Injections – Channels – Methods – Result Sets – Results – Sign Offs – Curves).





  • En la subpestaña “simple set” aparece el nombre con que guarde las muestras inyectadas y en la pestaña “Injections” aparecerán cada una de las inyecciones que fueron guardadas con el nombre de la muestra.

  • Una vez ubicada en la pestaña “Sample Set” ubico el mouse sobre el nombre de las muestras inyectadas (quedara de color negro), luego se debe presionar el icono que dice “Review Data” Process Extraer cromatograma (aquí se debe cambiar la longitud de onda (presionar enter) a la cual quiero medir el compuesto de interés (cromatograma en la parte superior), para ver con mayor claridad el compuesto en la muestra inyectada (cromatograma en la parte inferior)

  • Hacer clic en el icono que dice “Processing Parameters Wizard” OK (cuadro de procesamiento de método wizard) OK (cuadro de dialogo: nuevo método de proceso).







  • Luego se deba hacer clic en Next (cuadro de dialogo: Integration peak detección 1) Next Seleccionar donde dice “mínima área” y hacer “clic” en el “pic” de interés (una vez que el área mínima haya sido seleccionada, se le debe borrar el ultimo decimal y hacer clic en “Test” Next Next (aparecerá un cuadro con el nombre del “pic” que ha sido seleccionado junto con el tiempo de retención de este).



Nota: Hacer clic con el botón derecho del ratón en el gráfico para tener acceso a las opciones de zoom (Full View/Unzoom) del menú contextual.

  • Luego presiono donde dice: (cuadro de dialogo: Integration Peak detection 2) Next



  • Aparecerá un cuadro de dialogo: región de integración: se debe definir el área del “pic” del compuesto de interés desde donde comienza (start) hasta donde termina (end) Next






Nota: en este cuadro de dialogo, las áreas de los “pic” ya están seleccionadas (líneas de color rojo, observadas en la línea base).


  • En esta pantalla de rechazo de picos (Integration - Peak Rejection) contiene los resultados de la integración de la pantalla precedente. Si se han integrado adecuadamente los picos de interés, continuar con el paso siguiente. De lo contrario, utilizar las opciones Minimum Area (área mínima) y Minimum Height (altura mínima) para continuar definiendo la integración.




Nota: Hacer clic sobre un pico para el que se desee definir el área mínima o la altura mínima. El pico aparecerá marcado de color rojo. Hacer clic en Minimum Area o Minimum Height. El campo o campos se rellenan automáticamente con un número que representa el 95% de la altura o área real del pico. Las opciones Minimum Area y Minimum Height inhiben la integración de los picos con áreas y alturas iguales o inferiores a los valores introducidos. Como alternativa, introducir los valores en estos campos de forma manual.
Nota: Cuando se introducen los valores en estos campos de forma manual, se activa el botón Test y se puede hacer clic en él para visualizar los resultados obtenidos con los valores introducidos. Si el software determina los valores, el botón Test se desactiva y la prueba se realiza automáticamente.
Cuando se obtenga una integración satisfactoria, hacer clic en Next.


  • Se abrirá la pantalla general de calibrado (Calibration – General)



Nota: se debe aceptar lo que ya esta predeterminado y hacer clic en “Next”.

  • Aparecerá un cuadro de dialogo de “Quick Start” y se debe presionar Yes.



  • Se abrirá la pantalla de nombres y tiempos de retención (Calibration – Names and Retention Times).



Nota: donde dice “Name” se puede escribir el nombre específico correspondiente a cada pic (compuesto de interés).

  • Hacer clic en Next. Se abrirá la pantalla de cantidades predeterminadas (Calibration Default Amounts) con los nombres de los nuevos componentes introducidos en la tabla. Habrá una fila para cada uno de los picos integrados visualizados en el cromatograma




Nota: las cantidades (Amount) y las unidades (Units) se deben escribir de forma manual.

  • Hacer clic en Next y se abrirá la pantalla de patrones internos de calibrado (Calibration – Internal Standards).


Nota: Aceptar la selección predeterminada de External Standard Calibration (calibrado con patrones externos).


  • A continuación, hacer clic en Next. Se abrirá la pantalla del nombre del método de proceso (Processing Method Name).



Nota: Se debe escribir el nombre del método correspondiente y luego hacer clic en “Finish”.


  • El software Empower integrará el cromatograma aplicando los parámetros configurados, calibrará el patrón y archivará el nuevo método de proceso. Volverá a aparecer la ventana de visualización de datos (View Data) con la pantalla principal de revisión activa (Review Main) y con el nombre del método de proceso en la barra de estado.


Nota: Hacer clic en la pestaña Peaks para visualizar los resultados de la integración, como nombres de los picos, tiempos de retención, cantidades, etc.


    1. Comprobación Manual del Método de Proceso




  • Una vez que se realizaron todas las inyecciones, se deben de integran y cuantificar los cromatogramas, en donde se especifican las áreas, tiempo de retención y concentración de cada “pick”.

  • Se debe pinchar el icono que dice “View Data”, en esta ventana aparecerán todas las inyecciones realizadas.




  • Hacer clic en (integrar) para integrar el cromatograma.

  • Hacer clic en (calibrar) para calibrar el cromatograma.

  • Hacer clic en (cuantificar) para cuantificar el cromatograma.



Nota: Para visualizar los resultados del proceso de datos manual, hacer clic en el icono (icono de proceso) de la barra de herramientas. Se abrirá la ventana de revisión de datos (Review).


  • En la ventana “View Data”, al hacer clic, me aparecerán todas las inyecciones realizadas al lado izquierdo y al lado derecho me aparecerán los cromatogramas.

  • En la parte inferior en la ventana 2D Channels, y selecciono la línea, voy a File → Save → Calibration (voy guardando cada uno de mis puntos para luego poder hacer la curva de calibración).

  • Una vez que tengo los puntos guardados, presiono donde dice “Caliration Curve”, que es donde voy viendo mi curva de calibración (concentración conocida) con los puntos que fueron guardados anteriormente. Aquí se va creando la curva de cada uno de los componentes de interés.


Nota: A cada una de las concentraciones que voy guardando le voy colocando un nombre.


  • Luego presiono el icono donde dice “Review Main Window”, para regresar al cuadro inicial en donde tengo el cromatograma (cada uno de los compuestos identificados con sus nombres).

  • En el caso que se este inyectando muestra (no se conoce la concentración), en la parte inferior en la ventana 2D Channels, y selecciono la línea, voy a File → Save → Result (voy guardando cada uno de los compuestos que ya están integrados).


  1. Elaboración del Informe


Para generar un informe una vez que se han adquirido y procesado los datos (integración):



  • Hacer clic en Browse Project, en la barra de navegación. Aparecerá la ventana del examinador de proyectos (Browse Project). En la pare superior aparecen varias pestañas (Inyections, Results, Samples Sets, Channels, etc.)

  • En la pestaña Injections, aparece el listado de todas las inyecciones realizadas.

  • Hacer clic en la pestaña Results y, a continuación, en el botón Update para actualizar la visualización en pantalla. Seleccionar el resultado que se quiere visualizar (quedara seleccionado de color negro) y hacer clic en el icono para visualizar el cromatograma (se abrirá una pestaña, se debe presionar OK), luego se debe ir guardando cada uno de los cromatogramas, presionando el icono

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